L-effett tal-membrani ta ' l-ultrafiltrazzjoni b'qisien tal-pori differenti fuq it-tneħħija ta ' l-endotossina

Skont l-istatistika tagħna, fil-biċċa l-kbira tal-każijiet, l-għażla ta 'cassettes tal-membrana b'apertura tal-membrana ta' 10kd jew inqas tista 'tinterċetta b'mod effettiv il-biċċa l-kbira tal-endotossini, tnaqqas il-kontenut tal-endotossini għal livell baxx ħafna, u tissodisfa l-ħtiġijiet tal-biċċa l-kbira tal-applikazzjonijiet tal-industrija medika u farmaċewtika. Il-livell ta 'tnaqqis tal-kontenut ta' endotossina kien differenti b'daqs tal-pori differenti. Fid-dawl ta 'dan l-aspett, għamilna xi riċerka, il-kontenut huwa kif ġej:

 

X'inhu endotossina

L-endotossina, magħrufa wkoll bħala lipopolysaccharide, lipid A, sors tas-sħana, hija struttura unika fuq il-ħajt ta 'barra tal-ħajt taċ-ċellula ta' batterji Gram-negattivi (GNB), u hija kumplessa ta 'piż molekulari relattiv għoli. Minħabba l-eteroġeneità kimika ta 'endotossina, il-massa molekulari relattiva ta' endotossina minn sorsi differenti tista 'tvarja minn eluf għal għexieren ta' eluf, u minħabba l-amfifiliċità ta 'endotossina, tista' tifforma assoċjazzjoni fl-ilma, u l-massa molekulari relattiva tal-assoċjazzjoni tagħha jista' jilħaq 400,000 sa 1,000,000.

 

Għaliex għandha tneħħi l-endotossini

1. Ir-rwol tal-endotossina

L-endotossina għandha effett termoġeniku sinifikanti fuq il-mammiferi. Il-batterji jsiru tossiċi meta jmutu jew jaderixxu ma 'ċelluli oħra. Ammont żgħir ta 'endotossina (2 ng/kg piż tal-ġisem) injettat ġol-vini jista' jikkawża deni, u dożi kbar jistgħu jikkawżaw disturb fiċ-ċirkolazzjoni u xokk ta 'endotossina. Skont id-dispożizzjonijiet tal-farmakopea nazzjonali, il-kontenut ta 'endotossina f'mediċina jew preparazzjoni għandu jkun taħt il-limitu preskritt. Pereżempju, għall-albumina tad-demm tal-bniedem, il-limitu tal-kontenut tal-endotossina batterika għandu jkun inqas minn 2 EU/mL skont il-Proċedura tat-Test għall-Endotossina Batterjali tal-Prodotti Bijoloġiċi. Il-limitu għall-endotossini batteriċi fl-interferons għandu jkun inqas minn 10 EU/mL.

 

2. Kontaminazzjoni ta 'endotossina

L-endotossina għandha effetti bijoloġiċi ovvji kemm in vivo kif ukoll in vitro. F'sistemi ta 'ċelluli ħielsa, endotossini f'konċentrazzjonijiet nanogrammi jistgħu jaffettwaw l-imġieba ta' tipi speċifiċi ta 'ċelluli u anke molekuli, u b'hekk jaffettwaw attivitajiet fiżjoloġiċi normali.

Għalhekk, l-endotossina hija s-sors tat-tniġġis tal-biċċa l-kbira tal-materjali bijoloġiċi, u l-eżistenza tagħha tagħmel ħafna testijiet bijoloġiċi u tad-droga jidhru riżultati kaotiċi, li ġġib ħafna diffikultajiet għall-produzzjoni.

(1) Kontaminazzjoni tad-drogi. Pereżempju, varjetà wiesgħa ta 'mediċini tal-Punent sintetizzati b'metodi kimiċi u mediċini tradizzjonali Ċiniżi estratti minn pjanti jistgħu jiġu kkontaminati minn endotossini waqt is-sintesi jew l-estrazzjoni tagħhom.

(2) Materja prima għall-produzzjoni. Diversi prodotti tad-demm u midja taċ-ċelluli jistgħu wkoll ikunu ftit jew wisq ikkontaminati matul il-proċess ta 'preparazzjoni.

(3) Aġenti bijoloġiċi. Per eżempju, interferon, interleukin jew diversi proteini terapewtiċi jew peptidi manifatturati minn teknoloġija tad-DNA rikombinanti, l-użu ta 'E. coli bħala trasportatur ta' espressjoni fil-proċess tal-manifattura, jew fatturi esterni varji, huwa diffiċli li tiġi evitata l-kontaminazzjoni ta 'endotossini.

 

L-idea li titneħħa l-endotossina bl-ultrafiltrazzjoni

Minħabba l-massa molekulari relattiva kbira ta 'endotossini, membrani ta' ultrafiltrazzjoni jistgħu jintużaw biex ineħħu l-endotossini mill-ilma. L-għażla tad-daqs tal-pori u l-materjal tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni tiddependi fuq il-piż molekulari relattiv, il-karatteristiċi u l-kontenut ta 'piroġenu tal-mediċina li tkun qed tiġi ttrattata. Sabiex iżżomm il-biċċa l-kbira tal-piroġenu, huwa meħtieġ li tuża membrana ta 'ultrafiltrazzjoni b'massa molekulari relattiva ta' 5000 jew 10000, f'liema ħin il-pressjoni waqt l-operazzjoni hija ogħla, u mhix adattata għal xi preparazzjonijiet farmaċewtiċi li fihom massa molekulari relattiva kbira. komponenti. Minħabba li t-tneħħija tal-piroġenu se żżomm jew tassorbi l-ingredjenti effettivi fil-likwidu, u r-rendiment tal-prodott huwa affettwat ħafna.

Peress li l-molekuli ta 'endotossini huma ċċarġjati b'mod negattiv taħt kundizzjonijiet newtrali, l-għażla ta' materjali ċċarġjati b'mod pożittiv bħal polysulfone, polyacrylonitrile, polyamide u membrani oħra ta 'filtrazzjoni mikroporuża tista' ttejjeb l-effett ta 'tneħħija ta' molekuli ta 'endotossini. Barra minn hekk, huwa wkoll metodu biex tebgħa d-diatomaceous earth fuq il-film taċ-ċelluloża, u mbagħad adsorbi polyelectrolyte pożittiv fuqha għat-tneħħija ta 'endotossina. Madankollu, l-effett tat-tneħħija ta 'dawn il-membrani mikroporużi ċċarġjati fuq l-endotossina kien affettwat ħafna mill-pH. Il-filtru fil-fond ta 'Guidling Technology għandu earth diatomaceous, li jista' jintgħażel liberament jekk iżżidx ħlas pożittiv skont il-proċess tal-utent. Fil-proċess tat-tneħħija ta 'impuritajiet bħal ċelloli, debris taċ-ċelluli u proteini mixxellanji, l-istruttura poruża naturali interna tagħha tista' żżid it-tagħbija tal-membrana tal-filtrazzjoni.

 

Effett ta 'tneħħija ta' endotossini ta 'membrani ta' ultrafiltrazzjoni b'daqsijiet ta 'pori differenti

 

Hawnhekk niddiskutu l-effett tat-tneħħija ta 'membrani ta' ultrafiltrazzjoni minn diversi sorsi differenti ta 'każijiet ta' tneħħija ta 'endotossini:

1. Tneħħija ta 'endotossina batterika fl-injezzjoni ta' Shengmai permezz ta 'metodu ta' ultrafiltrazzjoni

1.1 Introduzzjoni

Pulse Injection hija tip ta 'soluzzjoni akwea sterilizzata magħmula minn polz SAN permezz ta' riforma tal-forma tad-dożaġġ. Huwa magħmul minn ġinseng aħmar, ophiopogon u schisandra schisandrae. Għandu effetti ta 'benefiċċju li jsaħħaħ il-polz qi, isaħħaħ u jistabbilizza d-deidrazzjoni, jistabbilizza l-pressjoni tad-demm, iżid il-forza kontrattili mijokardijaka, u għandu effett kliniku tajjeb fit-trattament ta' sistema kardjovaskulari u mard endokrinali.

 

1.2 Komponenti tal-membrana

Membrana ta' ultrafiltrazzjoni ta' gwida (massa molekulari relattiva ta' interċettazzjoni 10,30,100 kDa)

 

1.3 Metodi sperimentali

1.3.1 Preparazzjoni ta' intermedji likwidi li jipproduċu l-polz

Irreferi għall-proċess ta 'preparazzjoni ta' injezzjoni ta 'Zhongsheng Mai fl-Istandard Nazzjonali tad-Droga (WS3-B-2865-98-2011) u r-reviżjoni tiegħu (ZGB2011-48). Li jiżnu 100 g ta 'ġinseng aħmar, 312 g ta' ophiopogon u 156 g ta 'schisandra chinensis, ġinseng aħmar ġie estratt bil-metodu ta' rifluss tal-etanol, u ophiopogon chinensis u schisandra chinensis ġew estratti b'metodu ta 'distillazzjoni bil-fwar, u nkisbet 1L ta' intermedju likwidu mediċinali li jipproduċi l-polz kull 10 mL kien ekwivalenti għal 1 g ta 'ġinseng aħmar, 3 g ta' ophiopogon u 1.5 g ta 'schisandra chinensis).

 

1.3.2 Ultrafiltrazzjoni

Ittieħed ċertu ammont ta 'intermedju likwidu li jagħmel il-polz, il-pH ġie aġġustat għal 7.5, u mqiegħed fis-sistema ta' ultrafiltrazzjoni ttrattata bl-ilma. Wara l-interċettazzjoni tal-piż molekulari relattiv ta '10,30,100 kDa tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni tal-poliether ġie ultrafiltrat, u ċ-ċiklu tal-ultrafiltrazzjoni kien ibbilanċjat għal 60min. Wara li l-ultrafiltrazzjoni tlestiet, ġew ikkalkulati r-rati ta 'rkupru (R) ta' ginsenoside Rg1, Re, Rb1 u schisandrin A. Il-kontenut ta 'endotossina batterika qabel u wara l-ultrafiltrazzjoni kien imkejjel kwantitattivament b'metodu ta' turbidità dinamika, u r-rata ta 'tneħħija ta' endotossina batterjali fil-likwidu ġiet ikkalkulata (Q).

R=A filtru /A primittiv ×100%

Q= (filtru C -C) /C ×100%

Fil-formula, A hija l-ogħla żona ta 'kull komponent attiv fl-ultrafiltrat, A hija l-ogħla żona ta' kull komponent attiv fis-soluzzjoni oriġinali tad-droga, C hija l-kontenut ta 'endotossina batterjali fl-ultrafiltrat, u C hija l-kontenut ta' batterja endotossina fis-soluzzjoni oriġinali tad-droga.

 

1.4 Determinazzjoni tal-permeabilità tal-ingredjenti attivi

After ultrafiltration of two kinds of ultrafiltration membranes (with the relative molecular weight of 10, 30, 100kDa retained), the permeability of each active component is shown in Table 1. The results showed that with the increase of membrane pore size, the permeability of effective components increased correspondingly. When the pore size of the membrane reaches 100 kDa, the permeability of the effective components is equal to >. 90%, u t-tliet ingredjenti attivi kollha jistgħu jgħaddu minn membrana ta 'ultrafiltrazzjoni ta' 100 kDa. L-erja tal-quċċata ta 'kull komponent attiv fis-soluzzjoni ta' ultrafiltrazzjoni tal-membrana ta '100 kDa qabel u wara l-kromatogramma ġiet imqabbla minn HPLC, li jindika li ma kien hemm kważi l-ebda telf ta' 4 komponenti.

 

1.5 Studju dwar l-effett tat-tneħħija ta 'endotossina batterjali

Il-bidliet fil-kontenut ta 'endotossina batterjali f'intermedji likwidi li jipproduċu l-polz qabel u wara ultrafiltrazzjoni b'membrana ta' ultrafiltrazzjoni huma murija fit-Tabella 2. Ir-riżultati wrew li l-kontenut ta 'endotossina fil-likwidu oriġinali naqas b'mod sinifikanti wara ultrafiltrazzjoni b'piż molekulari relattiv differenti. Wara ultrafiltrazzjoni tal-membrana ta 'ultrafiltrazzjoni ta' 100 kDa, il-kontenut ta 'endotossina fil-likwidu kien ħafna inqas mill-valur tal-limitu ta' 5.0EU·mL-1 fl-injezzjoni klinika ta 'Shengmai.

1.6 Diskussjoni

F'dan id-dokument, ibbażat fuq l-effett ta 'membrana ta' ultrafiltrazzjoni magħmula minn PSO, instab li ginsenoside Rg1, Re, Rb1 u schisandra A kellhom kważi l-ebda telf meta l-membrana ta 'ultrafiltrazzjoni b'interċettazzjoni ta' piż molekulari relattiv ta '100 kDa intużat, u endotossini batterjali f' il-likwidu jista 'jitneħħa b'mod effettiv, u jissodisfa r-rekwiżiti tal-limitu kliniku. Meta mqabbel mal-karbonju attivat għat-tneħħija tal-piroġenu, it-teknoloġija tal-ultrafiltrazzjoni tista 'mhux biss telimina l-problemi ta' adsorbiment kompetittiv u saturazzjoni tal-adsorbiment, iżda wkoll tiggarantixxi s-sigurtà tal-injezzjoni fil-biċċa l-kbira, u tipprovdi bażi sperimentali għall-proċess ta 'preparazzjoni tal-injezzjoni Shengmai.

 

2. Influwenza tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni tal-interċettazzjoni b'piż molekulari ta '10kd fuq il-proċess tat-tneħħija tal-piroġenu tas-salina normali

 

2.1 Introduzzjoni

Fil-preparazzjoni ta 'prodotti bijoloġiċi ħielsa mill-piroġenu, ħafna drabi jiltaqgħu magħhom li l-endotossina eżoġena tikkawża piroġenu għoli, u l-utensili jistgħu jiġu solvuti permezz ta' ħami niexef u tixrib ta 'idrossidu tas-sodju, iżda l-preparazzjoni fuq skala kbira tas-soluzzjoni mhix adattata għat-trattament ta' hawn fuq, u huwa kkunsidrat li juża ippakkjar tanġenzjali tal-film tal-fluss għal soluzzjoni fuq skala kbira biex jinkiseb kontenut ta 'endotossina kwalifikata.

 

2.2 Tneħħija tal-endotossini

2.2.1 Trattament ta' ultrafiltrazzjoni tal-kampjuni

L-endotossina batterika hija ħafna iżgħar mill-batterja, b'dijametru A ta 'madwar 1-50nm, il-lipidu A huwa iżgħar, daqs żgħir u piż ħafif, u endotossina batterika għandha reżistenza tajba għas-sħana. Ġeneralment, il-pakkett tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni tal-fluss tanġenzjali 10kd jintuża biex jinterċetta l-endotossina u jieħu l-fluss tanġenzjali permezz tas-soluzzjoni.

2.2.3 Riżultati sperimentali

Guidling Technology użat materjal PES 10kd cassette tal-membrana biex twettaq esperiment ta 'mikrofiltrazzjoni fuq il-likwidu tal-għalf, u r-riżultati huma kif ġej:

Ir-riżultati wrew li l-cassette tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni bil-piż molekulari ta 'interċettazzjoni ta' 10kd prodott mit-teknoloġija Guidling jista 'jneħħi b'mod effettiv l-endotossina u jespandi aktar il-produzzjoni.

 

Dwar Guidling

Guidling Technology hija intrapriża nazzjonali ta 'teknoloġija għolja li tiffoka fuq bijofarmaċewtiċi, kultura taċ-ċelluli, purifikazzjoni u konċentrazzjoni ta' bijomediċina, dijanjosi u fluwidi industrijali. Aħna żviluppajna b'suċċess apparati ta 'filtru ċentrifugali, kasetts ta' ultrafiltrazzjoni u mikrofiltrazzjoni, filtru tal-virus, sistema TFF, filtru tal-fond, fibra vojta, eċċ Li jissodisfaw bis-sħiħ ix-xenarji ta 'applikazzjoni ta' bijofarmaċewtiċi, kultura taċ-ċelluli, eċċ. Il-membrani u l-filtri tal-membrana tagħna jintużaw ħafna f'konċentrazzjoni, estrazzjoni u separazzjoni ta 'prefiltrazzjoni, mikrofiltrazzjoni, ultrafiltrazzjoni u nanofiltrazzjoni. Il-ħafna linji ta 'prodotti tagħna, minn filtrazzjoni żgħira tal-laboratorju li tintuża darba għal sistemi ta' filtrazzjoni tal-produzzjoni, ittestjar ta 'sterilità, fermentazzjoni, kultura taċ-ċelluli u aktar, jissodisfaw il-ħtiġijiet tal-ittestjar u l-produzzjoni. Guidling Technology qed jistenna bil-ħerqa li jikkopera miegħek!