Applikazzjoni Ta 'Ultrafiltrazzjoni Fil-Produzzjoni Ta' Vaċċin tar-Rabbja Umana

Sabiex tiġi promossa l-applikazzjoni tal-ultrafiltrazzjoni fil-produzzjoni tal-vaċċin tal-idrofobija umana, intuża cassette tal-membrana ta 'ultrafiltrazzjoni 300kDa biex tikkonċentra s-soluzzjoni tal-ħsad tal-virus tar-rabja u tiskopri l-irkupru tal-antiġen, ir-rata tat-tneħħija tal-endotossini u r-rata tat-tneħħija tal-proteina ospitanti wara l-ultrafiltrazzjoni. Ir-riżultati wrew li taħt il-pressjoni xierqa, is-soluzzjoni tal-ħsad tal-virus tar-rabja kienet ikkonċentrata 80 darba, elużita 25 darba, ir-rata ta 'rkupru tal-antiġenu kienet 86.2%, ir-rata tat-tneħħija tal-endotossina batterjali kienet 87.5% ~ 88.7%, u ir-rata tat-tneħħija tal-proteina ospitanti kienet 91.6%.

 

Daħla

 

Ir-rabja hija marda żoonotika tradizzjonali u antika kkawżata mill-Virus tar-Rabbja (RV), b'rata ta' fatalità sa 100%. Fil-preżent, m'hemm l-ebda trattament effettiv għal wara l-espożizzjoni (jiġifieri ħsara lill-ġilda u lill-membrani mukużi) għajr vaċċin ta 'emerġenza u tilqim ta' immunoglobulina. Is-sors ewlieni tar-rabja fil-bnedmin huwa l-gdim minn annimali morda jew potenzjalment infettati (prinċipalment klieb). Ir-rata ta’ mortalità tar-rabja fiċ-Ċina tinsab fit-tieni post fid-dinja, u r-rabja hija waħda mill-problemi li qed thedded is-sigurtà tas-saħħa pubblika f’pajjiżna. Il-glikoproteina kapsulari tal-virus tar-rabja, li hija l-uniku antiġen ewlieni li jinduċi l-produzzjoni ta 'antikorp newtralizzanti protettiv, kienet il-fokus ta' riċerka u żvilupp ta 'vaċċini ġodda u teknoloġiji ġodda ta' dijanjosi u trattament tal-virus tar-rabja.

 

Il-virus tar-rabja jappartjeni għall-virus tar-rabja tal-ġeneru tal-familja rhabdovirus. Il-forma tan-nukleokapsid hija elastika, in-nukleokapsid huwa helically simetriku, u l-wiċċ għandu envelop li jkun fih RNA single-stranded. Huwa l-patoġenu li jikkawża r-rabja. Il-virus tar-rabja għandu żewġ antiġeni ewlenin: wieħed huwa l-antiġenu tal-glikoproteina fuq il-membrana ta 'barra tal-virus, li jista' jorbot mar-riċettur tal-acetylcholine biex jagħmel il-virus newrotossiku, u jipproduċi antikorpi newtralizzanti u antikorpi li jinibixxu l-emagglutinazzjoni fil-ġisem, u l-antikorpi newtralizzanti għandhom effett protettiv; L-ieħor huwa l-antiġen tar-riboproteina ta 'ġewwa, li jista' jagħmel il-ġisem jipproduċi antikorpi li jorbtu komplementari u precipitin, u m'għandux effett protettiv.

 

L-endotossina hija tip ta 'sustanza lipopolysaccharide (LPS), li għandha reżistenza għas-sħana u stabbiltà kimika u mhix faċli li tinqered. Jekk ikun hemm ċerta konċentrazzjoni ta 'endotossina fil-vaċċin, tikkawża deni sever u anke mewt wara t-tilqim, għalhekk il-kontenut ta' endotossina fil-vaċċin għandu jitnaqqas kemm jista 'jkun. L-edizzjoni tal-2005 tal-Farmakopea Ċiniża (Parti III) iddeterminat li l-valur ta 'kontroll tal-indiċi kwalifikat tal-endotossina tal-vaċċin tar-rabja m'għandux ikun ogħla minn 100EU/doża. Bl-iżvilupp mgħaġġel tat-teknoloġija tas-separazzjoni tal-membrana, l-applikazzjoni tat-teknoloġija tas-separazzjoni tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni biex tnaqqas il-kontenut ta 'endotossina fil-vaċċini qed issir dejjem aktar mifruxa fl-industrija farmaċewtika.

 

Vaċċin tar-rabja huwa vaċċin kontra r-rabja. Normalment ikun hemm tliet tipi ta 'vaċċini tar-rabja, inkluż vaċċin taċ-ċelluli Vero purifikat, vaċċin taċ-ċelluli diplojdi umani, u vaċċin tal-kultura taċ-ċelluli primarji. Il-vaċċin tar-rabja huwa magħmul billi tlaqqam il-virus iffissat tal-virus tar-rabja f'matriċi ċellulari, wara l-kultura, il-ħsad, il-konċentrazzjoni, l-inattivazzjoni, il-purifikazzjoni, u żżid stabilizzatur xieraq. Il-funzjoni ewlenija tal-vaċċin tar-rabja hija li tistimula l-ġisem biex jipproduċi rispons immuni rapidu u jipproduċi antikorpi protettivi kontra l-virus tar-rabja, sabiex jipprevjeni l-infezzjoni kkawżata mill-virus u jnaqqas ir-riskju ta 'mard.

 

 

Il-proċess tal-produzzjoni tal-vaċċin għandu rwol importanti biex jiżgura l-kwalità tal-vaċċin, speċjalment il-kwantifikazzjoni ta 'xi indikaturi fil-proċess ta' produzzjoni hija aktar importanti. Fil-proċess tal-produzzjoni tal-vaċċin tar-rabja umana, it-teknoloġija tal-konċentrazzjoni tal-ultrafiltrazzjoni hija mezz meħtieġ biex tipproduċi vaċċin tar-rabja umana. L-użu ta 'membrana ta' ultrafiltrazzjoni ta 'apertura raġonevoli għall-konċentrazzjoni ta' ultrafiltrazzjoni jista 'jneħħi b'mod effettiv l-endotossina u l-proteina ospitanti, u jżomm l-antiġenu RV, li jwassal għall-produzzjoni tal-vaċċin u t-titjib tal-kwalità. Il-massa molekulari relattiva tal-molekuli RV hija 350kDa ~ 460kDa, u fit-teorija, RV jista 'jinqabad kompletament permezz ta' konċentrazzjoni ta 'ultrafiltrazzjoni bl-użu ta' cassette tal-membrana b'piż molekulari ta 'interċettazzjoni ta' 100kDa u 300kDa. L-endotossina ħafna drabi tifforma struttura aggregata f'soluzzjonijiet milwiema differenti, minħabba l-grad ta 'aggregazzjoni, id-daqs molekulari huwa differenti. Il-massa molekulari relattiva tal-monomeru tal-endotossina hija 10kDa ~ 20kDa, u l-massa molekulari relattiva tal-forma ta 'polimerizzazzjoni tagħha hija 300kDa ~ 1000kDa jew aktar minn 1000kDa. Ibbażat fuq id-differenza fil-piż molekulari, l-antiġen RV fil-vaċċin tar-rabja umana nżamm u l-endotossina u l-proteina ospitanti fil-vaċċin tar-rabja umana tneħħew permezz ta 'membrana ta' ultrafiltrazzjoni ta '300kDa.

 

F'dan l-esperiment, cassette tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni b'apertura ta '300kDa u żona tal-membrana 0.11m2 intuża bħala trattament ta' kampjun żgħir biex jikkonċentra prodotti intermedji tal-vaċċin tar-rabja umana, u fluss tal-membrana, effiċjenza tat-trattament, konċentrazzjoni multipla, interċettazzjoni tal-antiġeni, tneħħija tal-endotossini , u t-tneħħija tal-proteina ospitanti ġew ittestjati.

 

2Metodu tal-Materjal

 

2.1 Materjali sperimentali

Virus tar-rabja virus fiss CTN-IV razza; Ċelloli Vero; 0.5M idrossidu tas-sodju; 30Cassette tal-membrana tal-ultrafiltrazzjoni 0kDa (materjal PES, żona tal-membrana 0.11m²).

 

2.2 Metodi sperimentali

2.2.1 Preparazzjoni tas-soluzzjoni tal-ħsad tal-virus

Iċ-ċelluli Vero iffriżati ġew risuxxitati f'ilma sħun f'37 grad ~ 39 grad, is-sospensjoni taċ-ċelluli ġiet imxarrba barra, u mbagħad miżjuda ma '199 mezz ta' kultura li kien fih 10% serum tal-għoġol inattivat. Ċelloli uniformi monosaff kienu kkultivati ​​f'37 grad. Ir-razza CTN-IV ġiet imlaqqma bil-virus tar-rabja fi proporzjon ta' 0.1mol/L u kkultivata f'37 grad. Wara 48 siegħa, il-mezz tal-kultura ġie mormi u 199 medju tal-kultura li kien fih 0.1% albumina tad-demm uman ġie miżjud biex tinżamm il-kultura fi 33 grad ~ 35 grad. Ħsad il-velenu tal-marda darba kull 3d-5d, u għaqqad il-fluwidi multipli tal-ħsad.

 

2.2.2 Installazzjoni tal-Cassette tal-Membrana

Installa l-cassette tal-membrana u qabbad il-wajers kif muri fil-figura hawn taħt.

 

2.2.3 Ħasil ​​tal-Ilma

Agħlaq il-valv tad-dħul, il-valv tar-ritorn u l-valv permezz, u daħħal it-tarf tar-ritorn u l-pajp tat-tarf fit-tank tal-likwidu tal-iskart. Imla t-tank tad-dħul b'1L ilma għall-injezzjoni.

Iftaħ il-valvi tad-daħla u tar-ritorn, agħlaq il-valvi li jgħaddu, iftaħ il-pompa, naddaf il-linja tar-ritorn b'volum ta '10% ta' ilma purifikat jew ilma għall-injezzjoni, u żomm il-pressjoni tad-dħul f'0.35bar (5psi).

Iftaħ il-valv tal-filtru, agħlaq il-valv tar-ritorn, u uża l-ilma tal-injezzjoni li jifdal biex tnaddaf il-pajp tal-filtru, billi żżomm TMP f'{0}}.35bar.

 

2.2.4 Diżinfezzjoni

Agħlaq il-valv tad-dħul, il-valv tar-ritorn u l-valv tat-trasmissjoni, u daħħal it-tarf tar-ritorn u l-linji tat-tarf tat-trażmissjoni fit-tank tal-likwidu tal-iskart. Imla t-tank tad-dħul b'2L ta' soluzzjoni tat-tindif.

Iftaħ il-valvi tad-daħla u tar-ritorn, agħlaq il-valvi li jgħaddu, iftaħ il-pompa, naddaf il-linja tar-ritorn b'200mL ta' idrossidu tas-sodju 0.5M, u żomm il-pressjoni tad-dħul f'0.35bar (5psi) .

Iftaħ il-valv li jgħaddi, agħlaq il-valv tar-ritorn, u naddaf il-pajp li jgħaddi b'volum ta' 200mL ta' soluzzjoni tat-tindif, filwaqt li żżomm TMP f'0.35bar.

Imbagħad it-tarf tar-ritorn u l-pajp tat-tarf li jgħaddi huma mdaħħla fit-tank tal-likwidu għat-tindif ċikliku. Tindif taċ-ċiklu b'1 ~ 1.5 darbiet ir-rata tanġenzjali tal-fluss tal-proċess għal 30min.

Ixxotta 0.5M ta' idrossidu tas-sodju u laħlaħ bl-ilma għall-injezzjoni skond 2.2.4 sakemm ikun newtrali.

 

2.2.5 Test tal-fluss tal-ilma

Żid ilma purifikat mat-tank tad-dħul, kejjel u rreġistra t-temperatura tal-ilma fit-tank tad-dħul. Daħħal it-tarf tar-ritorn fit-tank. Ibda l-pompa u aġġusta l-veloċità tal-pompa u l-valv tar-ritorn biex tikseb differenza ta 'pressjoni transmembrana ta' 0.35bar (5psi). Bl-użu ta' ċilindru, kejjel u rreġistra r-rata tal-fluss fit-tarf li jgħaddi f'mL/min. Aġġusta l-veloċità tal-pompa u l-valv tar-ritorn biex tikseb pressjoni differenzjali transmembrana ta '1bar (15psi). Bl-użu ta' ċilindru, kejjel u rreġistra r-rata tal-fluss fit-tarf li jgħaddi f'mL/min.

Biex tistandardizza l-valur tal-fluss tal-ilma, jaqsam il-valur tal-fluss tal-ilma kkalkulat bid-differenza tal-pressjoni transmembrana u mmultiplika l-fattur ta 'korrezzjoni tat-temperatura fit-tabella li ġejja.

 

2.2.6 Konċentrazzjoni ta 'ultrafiltrazzjoni

Aħsel l-ilma mis-sistema bil-buffer top. Ċiklu għal 5min biex taġġusta l-pH u l-istabbiltà tal-jone tas-sistema. Jekk it-temperatura teħtieġ li tiġi aġġustata, kompli ċ-ċiklu sakemm it-temperatura tas-sistema tkun stabbli.

Żid il-likwidu tal-għalf mat-tank tad-dħul, issettja rata tal-fluss tal-għalf (eż. 400LMH), u ttestja r-rata tal-fluss tal-fluss f'valuri TMP differenti. Skont id-dejta tat-test, il-kurvi ġew imfassla b'TMP bħala l-axxissa u Flux bħala l-ordinata.

Idderieġi l-pajp minn ġewwa f'kontenitur jew drenaġġ adattat, bħal tankijiet tal-ġbir mit-tarf, tankijiet tal-likwidu tal-iskart, u drenaġġ tal-proċess.

Irreġistra l-piż inizjali tal-likwidu tal-għalf fit-tank tal-għalf, ibda l-pompa tal-għalf, u ċċirkola bil-mod il-likwidu tal-għalf għal 3min sa 4min. Ir-riċirkolazzjoni tista 'tgħin biex tneħħi l-arja residwa fil-mogħdija tal-fluss, u b'hekk timmassimizza l-prestazzjoni tal-film.

Iftaħ il-valv permezz, żid bil-mod il-veloċità tal-pompa sakemm tintlaħaq ir-rata tanġenzjali ottimali tal-fluss, u aġġusta l-valv tar-ritorn biex tikseb l-aħjar TMP tas-sistema.

Imbagħad poġġi t-tubu fil-kontenitur tal-ġbir, ibda l-ħin meta l-likwidu jidħol fil-kontenitur, u rrekordja l-pressjoni tad-daħla u tar-ritorn f'intervalli xierqa, u rrekordja l-kwalità tal-likwidu matul iż-żmien fit-tarf tar-ritorn u t-tarf permezz biex tikkalkula l-istantanju rata tal-fluss.

Il-konċentrazzjoni tal-ultrafiltrazzjoni tal-kampjun titlesta meta l-volum likwidu tal-għalf jitnaqqas għall-volum tal-konċentrazzjoni fil-mira.

 

2.2.7 Dijaliżi

Poġġi l-pajp tad-dħul, il-pajp ta 'riforniment u l-pajp tar-ritorn fit-tank tad-dħul, poġġi l-pajp tat-trażmissjoni fil-kontenitur tal-ġbir, u poġġi l-kontenitur tal-ġbir fuq il-bilanċ biex ċar.

Iftaħ il-valv tar-ritorn, ibda l-pompa tad-dħul, iftaħ il-valv permezz, aġġusta l-veloċità tal-pompa u TMP għall-valur xieraq. Iftaħ il-pompa tar-riforniment, żomm il-volum tal-likwidu fit-tank tad-dħul mhux mibdul, u ibda d-dijalisi ta 'volum ugwali. Ibda l-ħin meta l-likwidu jidħol fil-kontenitur, u rrekordja l-pressjoni fit-tarf tad-daħla, it-tarf tar-ritorn u l-massa tal-likwidu fl-intervall ta 'ħin xieraq, u akkwista r-rata tal-fluss istantanja permezz ta' kalkolu.

 

2.2.8 CIP

L-ewwel laħlaħ bil-buffer, imbagħad laħlaħ bl-ilma għall-injezzjoni (operazzjoni 2.2.3), imbagħad naddaf bl-aġent tat-tindif (operazzjoni 2.2.4), u finalment laħlaħ bl-ilma għall-injezzjoni (operazzjoni 2.2.3).

 

2.2.9 Test tal-fluss tal-ilma

L-operazzjoni hija kif ġej: 2.4.5.

 

2.2.10 Preservazzjoni tal-cassette tal-membrana

Ħażna għal żmien qasir (Inqas minn jew ugwali għal 3 ijiem), żomm il-cassette tal-membrana fl-apparat u uża s-soluzzjoni tal-ħażna biex iċċikla għal 10min sa 15min, agħlaq il-valv tas-sistema, aqta 'l-provvista tal-enerġija għall-pompa tal-likwidu, u tiżgura li t-tank tad-dħul tal-likwidu jkun issiġillat b'mod korrett.

Jekk il-ħin tal-ħażna huwa ta '3 ijiem sa xahar, jekk jogħġbok neħħi l-cassette tal-membrana mill-apparat u siġillha f'borża tal-plastik jew kontenitur ieħor mitbuq. Żid madwar 50mL sa 100mL tas-soluzzjoni tal-ħażna f'borża tal-plastik jew f'kontenitur mitbuq u issiġillaha. Jew jista 'jiġi mgħaddas direttament fis-soluzzjoni tal-ħażna. It-tabella li ġejja tirrakkomanda kundizzjonijiet ta 'ħażna.

 

3 Riżultati u analiżi

 

3.1 Investigazzjoni ta 'fatturi li jinfluwenzaw l-effiċjenza tat-tneħħija tal-piroġenu

Pressjoni ta 'operazzjoni ta' ultrafiltrazzjoni: 15-il lott tat-test tmexxew kontinwament. F'kull lott, il-pressjoni tal-filtrazzjoni nżammet f'5, 10, 15 u 2{{10}}psi waqt l-ultrafiltrazzjoni, u l-likwidu tal-ħsad tal-virus kien ikkonċentrat 30 darba u eluwit b'likwidu buffer (10 darbiet il-volum) fi fluss kontinwu. Riżultati kif murija fit-tabella hawn taħt, ir-rata ta 'tneħħija ta' endotossina kienet inqas minn 87.0%, ir-rata ta 'rkupru ta' antiġen kienet stabbli għal 86.0%, u r-rata ta 'tneħħija tal-proteina ospitanti kienet stabbli f'90.0%, li jindika li pressjonijiet operattivi differenti kellhom ftit influwenza fuq l-effett tal-irkupru tal-antiġen, it-tneħħija tal-endotossini u t-tneħħija tal-proteina ospitanti.

Proporzjon ta 'konċentrazzjoni ta' ultrafiltrazzjoni: 15-il lott tat-test kienu mmexxija kontinwament. F'kull lott, il-likwidu tal-ħsad tal-virus kien ikkonċentrat 30 darbiet, 50 darbiet, 80 darba u 100 darba rispettivament waqt l-ultrafiltrazzjoni. Il-pressjoni tal-filtrazzjoni nżammet f'20psi, u l-likwidu buffer (10 darbiet il-volum) ġie eluwit fi fluss kontinwu. Riżultati kif murija fit-tabella li ġejja, ir-rata ta’ tneħħija ta’ endotossina varjat minn 53.3% sa 86.9%, ir-rata ta’ rkupru tal-antiġenu baqgħet stabbli għal 86.0%, u r-rata ta’ tneħħija tal-proteina ospitanti kien stabbli għal 91.0%. Fil-kampjuni segmentati, ma nstab l-ebda antiġen fis-soluzzjoni tat-trażmissjoni, u inqas minn 10% tal-proteina ospitanti baqgħet fis-soluzzjoni tal-virus ikkonċentrat. Il-konċentrazzjoni ta 'endotossina fis-soluzzjoni kkonċentrata tal-virus żdiedet biż-żieda tal-ħinijiet tal-konċentrazzjoni, u r-rata tat-tneħħija tal-endotossina kienet l-ogħla fil-kampjun ikkonċentrat ta' 80 darba, u l-manifattur seta 'wkoll jikkunsidra l-konċentrazzjoni ta' 100 darba, li mhux biss tejbet l-effiċjenza tal-produzzjoni u naqqas l-ispiża, iżda ssodisfa wkoll ir-rekwiżiti tal-produzzjoni tal-vaċċin.

 

3.2 Tnaqqis tal-fluss tal-cassette tal-membrana u riġenerazzjoni tat-tindif

Wara t-trattament, ir-rata ta 'rkupru tal-fluss tal-membrana kienet 92.6%. L-ewwel rata ta 'rkupru tal-cassette tal-membrana l-ġdida hija normali, skont il-proprjetajiet ta' osservazzjoni attwali tal-likwidu tal-għalf, it-tbassir sussegwenti tat-tieni u l-ħinijiet NTH, ir-rata ta 'rkupru tal-fluss tal-cassette tal-membrana se tkun qrib id-data wara dan it-trattament, u għandhom tendenza li jkunu stabbli. Fi żmien 2h ta 'użu wieħed, it-tnaqqis tal-cassette tal-membrana kien ideali, u 10% biss tal-fluss tal-membrana kien eżawrit taħt operazzjoni ġenerali.

3.2.1 Tnaqqis tal-fluss fil-proċess tat-trattament tal-cassette tal-membrana

3.2.2 Riżultat tat-tindif u r-riġenerazzjoni tal-cassette tal-membrana

 

Dwar Guidling

 

Guidling Technology hija intrapriża nazzjonali ta 'teknoloġija għolja li tiffoka fuq bijofarmaċewtiċi, kultura taċ-ċelluli, purifikazzjoni u konċentrazzjoni ta' bijomediċina, dijanjosi u fluwidi industrijali. Aħna żviluppajna b'suċċess apparati ta 'filtru ċentrifugali, kasetts ta' ultrafiltrazzjoni u mikrofiltrazzjoni, filtru tal-virus, sistema TFF, filtru tal-fond, fibra vojta, eċċ Li jissodisfaw bis-sħiħ ix-xenarji ta 'applikazzjoni ta' bijofarmaċewtiċi, kultura taċ-ċelluli, eċċ. Il-membrani u l-filtri tal-membrana tagħna jintużaw ħafna f'konċentrazzjoni, estrazzjoni u separazzjoni ta 'prefiltrazzjoni, mikrofiltrazzjoni, ultrafiltrazzjoni u nanofiltrazzjoni. Il-ħafna linji ta 'prodotti tagħna, minn filtrazzjoni żgħira tal-laboratorju li tintuża darba għal sistemi ta' filtrazzjoni ta 'produzzjoni, ittestjar ta' sterilità, fermentazzjoni, kultura taċ-ċelluli u aktar, jissodisfaw il-ħtiġijiet tal-ittestjar u l-produzzjoni. Guidling Technology qed jistenna bil-ħerqa li jikkopera miegħek!