Studju dwar l-Abbiltà tat-Tkessiħ tal-Virus tal-Proċess Downstream tal-Antikorp Monoklonali
Prodotti tal-bijoteknoloġija derivati minn linji taċ-ċelluli jistgħu jkunu f'riskju ta 'kontaminazzjoni tal-virus - il-limitu jiddependi fuq numru ta' fatturi, inkluż is-sors tal-preparazzjoni, il-materja prima użata, is-sistema ta 'produzzjoni, reaġenti ta' purifikazzjoni u eċċipjenti. L-istudju tat-tneħħija jew l-inattivazzjoni tal-viruses fil-proċess tal-manifattura huwa pass ewlieni fit-tnaqqis tal-potenzjal għal trażmissjoni jatroġenika ta 'viruses patoġeniċi u b'hekk jitnaqqas ir-riskju, li huwa essenzjali għas-sikurezza tal-prodotti. Qabel ma l-prodotti bijoloġiċi jkunu jistgħu jidħlu fi provi kliniċi u jiġu kkummerċjalizzati, il-proċess tal-produzzjoni tagħhom irid jintwera li għandu l-kapaċità li jneħħi viruses magħrufa u preżunti.
01 Valutazzjoni tas-sigurtà tal-virus tal-prodott ta' antikorpi monoklonali
Ir-riċerka dwar l-abbiltà tat-tneħħija tal-virus hija ġeneralment billi żżid il-virus indikatur tat-titer magħruf mal-prodott intermedju fi stadji differenti tal-produzzjoni, imbagħad tiddetermina t-titer tal-virus residwu fil-kampjun ittrattat bi proċess speċifiku, u finalment tevalwa l-valur tat-tnaqqis tal-log (LRV) tat-titru tal-virus. Passi tal-proċess għal LRV Iktar minn jew ugwali għal 4log10 ġeneralment jitqiesu bħala passi effettivi għat-tneħħija tal-virus. Il-proċess ma 'LRV<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.
Meta tuża l-metodu ta 'proċess ta' produzzjoni simulat (proċess imnaqqas), huwa meħtieġ li tiddisinja riċerka raġonevoli ta 'tneħħija tal-virus/inattivazzjoni u pjan tat-test relatat mal-proċess ta' produzzjoni attwali kemm jista 'jkun, speċjalment il-passi effettivi tal-proċess ta' produzzjoni. Il-proċess simulat għandu jkun strettament konsistenti mal-proċess attwali f'termini ta 'parametri tat-test u kundizzjonijiet ta' kontroll.
02 Komunement jindika viruses u skemi ta' verifika
Vajrusis indikaturi komuni huma murija fit-Tabella 1.
Fl-istadju investigattiv ta' Applikazzjoni ta' mediċina ġdida (IND), prodott bijoteknoloġiku jeħtieġ studji ta' tneħħija virali għal mill-inqas 2 viruses mudell, tipikament jagħżlu retrovirus wieħed (X-MuLV) u parvovirus wieħed (MMV). Matul il-fażi tal-applikazzjoni tal-liċenzja tal-bijoloġiċi (BLA), l-istudji tat-tneħħija tal-virus tipikament isiru bl-użu ta’ 3-5 viruses speċifiċi/mhux speċifiċi u 3-5 passi tal-proċess huma evalwati biex juru li l-prodott għandu fattur ta’ sikurezza adegwat minn perspettiva tas-sigurtà tal-virus. Minħabba linji gwida differenti fid-dar u barra, hemm xi differenzi fil-passi tal-verifika tal-eliminazzjoni tal-virus użati għad-dikjarazzjonijiet. L-iskemi ta' verifika tat-tneħħija tal-virus użati b'mod komuni fil-proċess tal-produzzjoni tal-mAb huma murija fit-Tabella 2.
03 Kapaċità tat-tneħħija tal-virus tal-proċessi downstream
3.1 Il-kapaċità tal-proċessi downstream li jneħħu viruses differenti
Mill-2009, prodotti ta 'antikorpi monoklonali mressqa lill-FDA għal IND u BLA, kromatografija ta' affinità ta 'proteina A, pH baxx, kromatografija ta' skambju anjoniku AEX (mod ta 'penetrazzjoni tal-fluss), kromatografija ta' skambju ta 'katjoni CEX (irbit - mod ta' elużjoni), u validazzjoni ta 'tneħħija tal-virus eskluża Il-filtrazzjoni tal-virus huma l-aktar familji ta’ virus indikatur użati b’mod komuni u l-medja u l-firxa tal-effetti ta’ tneħħija tagħhom huma murija fil-Figura 1.
Għar-retroviruses, bl-eċċezzjoni ta 'CEX, li għandu LRV ta' madwar 3log10 (kif muri fit-tabella A-bar fil-Figura 1), il-proċessi l-oħra kienu robusti (LRV akbar minn jew ugwali għal 4log10). Herpesviruses u retroviruses għandhom effetti ta 'tneħħija simili u LRV > 4log10 (kif muri fil-grafika B-bar fil-Figura 1). Virusijiet żgħar mingħajr pakkett, bħal parvovirus, huma aktar diffiċli biex jitneħħew b'mod effettiv, huma reżistenti għat-trattament kimiku, u ma jinqabdux faċilment minn filtri (muri fil-grafika C-bar fil-Figura 1). Filtri AEX u virus żgħar biss kienu effettivi biex ineħħu parvoviridae (medja LRV > 4log10).
Il-proċessi murija fil-Figura 1 huma ProteinA, AEX (mod ta 'penetrazzjoni tal-fluss), CEX (mod ta' konkomittazzjoni-eluzzjoni), inattivazzjoni ta 'pH baxx ("inkompleti "versus" kompluti "tneħħija), u filtrazzjoni devirus b'apertura kbira u żgħira.
3.2 Fatturi li jinfluwenzaw il-proċessi downstream fuq il-kapaċità tat-tneħħija tal-virus
Id-distribuzzjoni tal-valuri LRV għal kull proċess tidher fil-Figura 2. L-istudji bi 0 ~ 21og10 ġew ikklassifikati bħala grupp LRV baxx, u dawk b'aktar minn 6log10 ġew ikklassifikati bħala grupp LRV għoli għal analiżi komparattiva.
3.2.1 Kromatografija ta' affinità ta' ProteinaA
Ma kien hemm l-ebda korrelazzjoni sinifikanti bejn il-valur LRV tal-proċess tal-Proteina A u l-bilanċ/buffer tal-ħasil, il-mili, il-kompożizzjoni tal-eluwent u l-valur tal-pH tal-eluzzjoni. Id-denominatur komuni tal-grupp LRV baxx huwa li l-materja prima hija pjuttost kumplessa, u jista 'jkun li l-interazzjoni kumplessa tal-materja prima u l-mili taffettwa b'mod negattiv il-kapaċità tal-kolonna kromatografika li tneħħi l-viruses.
3.2.2 AEX (Flow Through Mode)
Strauss et al. wera li l-pH u l-konduttività tal-kampjuni AEX jistgħu jaffettwaw l-LRV. Madankollu, ir-riżultati statistiċi ta 'Miesegaes et al wrew li, simili għal ProteinA, l-LRV ta' AEX (mod ta 'penetrazzjoni tal-fluss) ma kellu l-ebda korrelazzjoni sinifikanti ma' buffers, fillers, pH u konduttività differenti, li jistgħu jkunu dovuti għall-ottimizzazzjoni tal-pH u l-konduttività fil-kundizzjonijiet tal-proċess tal-każ irrappurtat.
3.2.3 CEX(Irbit - Mod ta' Elużjoni)
It-tneħħija tal-virus permezz tal-proċess CEX mhix robusta biżżejjed. Ma kien hemm l-ebda korrelazzjoni sinifikanti bejn l-LRV fil-grupp LRV għoli u l-buffer, il-livell ta 'esperjenza, jew kwalunkwe proprjetajiet ta' kolonna kromatografika, bħall-għoli tal-kolonna u t-tip ta 'reżina. Madankollu, il-valuri tal-pH tal-ekwilibriju/tagħbija u l-eluzzjoni użati fl-istudju LRV għoli kienu t-tnejn aktar baxxi, f'5.3±0.2; Fil-grupp LRV baxx, il-pH kien 6.0±0.2. Fattur ieħor huwa li l-konċentrazzjoni tal-melħ fil-buffer tista 'wkoll tikkawża d-differenza fil-valur LRV. Il-buffer użat fl-istudju LRV baxx kellu konċentrazzjoni ogħla ta 'melħ, b'konċentrazzjoni medja ta' 290±120 mM fis-soluzzjoni tat-tagħbija/ibbilanċjar u 340±70 mM fl-eluwent, filwaqt li l-konċentrazzjonijiet ta 'NaCl fl-istudju LRV għoli kienu 58 ±27 mM u 183±31 mM rispettivament.
3.2.4 Inattivazzjoni ta' pH baxx
Fil-proċess ta 'pH Baxx, il-pH huwa parametru ewlieni tal-proċess, u pH ta' 3.8 huwa biżżejjed biex inattiva r-retrovirus bi grad. Il-grupp LRV baxx kellu pH ta '3.9, filwaqt li l-istudju LRV għoli kellu pH ta' 3.4.
3.2.5 It-tneħħija tal-Filtrar tal-Virus
Kemm għal filtri ta 'apertura żgħira kif ukoll kbira, il-valur LRV tat-tneħħija ta' MuLV ma kienx inqas minn 2log10, u 1% biss tal-istudji kienu taħt 3log10 (muri fil-kolonni h u i fil-Figura 2). It-tneħħija ġenerali ta 'retroviruses minn filtri tal-virus b'apertura kbira kienet inqas minn dik minn filtri tal-virus b'apertura żgħira (kif muri fil-grafika C-bar fil-Figura 1). Ir-raġuni ewlenija li taffettwa r-riżultat tat-tneħħija tal-parvovirus hija t-tipi differenti ta 'filtri. B'mod ġenerali, l-iffiltrar kontra l-virus jista 'jneħħi b'mod affidabbli l-viruses.
Il-proċessi huma Proteina A(a), mod ta 'penetrazzjoni AEX (b), rbit CEX - mod ta' elużjoni (c), rbit AEX Ⅰ mod ta 'eluzzjoni (d), inattivazzjoni ta' pH baxx (" tneħħija "mhux kompluta" u" kompleta) (e ~ g), u daqs tal-pori kbar (h) u daqs żgħir tal-pori (i ~ j) filtrazzjoni devirus (fejn, a ~ i: Retrovirus; j: Parvovirus).
04 Innovazzjonijiet u sfidi fil-valutazzjoni tas-sigurtà tal-virus
L-iżvilupp kontinwu u l-innovazzjoni fil-qasam tal-proċessi bijofarmaċewtiċi downstream inevitabbilment iġibu innovazzjonijiet fil-valutazzjoni tat-tneħħija tal-virus. Avvanzi fil-proċessi upstream u downstream - bħal bijoproċessi ta' fluss kontinwu - għamluha meħtieġa li jiġu vvalutati u stabbiliti proċessi effettivi u robusti għat-tneħħija tal-virus. Waqt fluss kontinwu, passi bħall-inattivazzjoni tal-virus u l-filtrazzjoni tal-virus għadhom mistennija li jsiru fil-modalità tal-lott. Għalkemm il-kapaċità tat-tneħħija tal-virus tal-proċessi kromatografiċi fil-modalità ta' fluss kontinwu m'għandhiex tkun sostanzjalment differenti minn dik tal-ipproċessar tal-lott, għandha tkun appoġġjata minn data.
05 Prospett
Minn perspettiva ta 'sikurezza viroloġika, is-sigurtà eċċellenti tal-industrija bijofarmaċewtika tista' tiġi attribwita fil-biċċa l-kbira għall-aderenza stretta tal-industrija ma 'tliet strateġiji ewlenin għas-sikurezza virali: sorsi u ttestjar adegwati ta' sorsi ta 'materjal u bank taċ-ċelluli, id-dokumentazzjoni ta' valutazzjonijiet ta 'tneħħija virali (studji ta' validazzjoni tal-virus), u ittestjar virali waqt il-proċess. Il-karatteristiċi ta 'mediċini bijoloġiċi prodotti minn sottostrati ta' ċelluli ġodda jistgħu jinbidlu b'riskji differenti, u strateġiji tajbin ta 'ġestjoni tar-riskju huma meħtieġa biex jiżguraw is-sigurtà ta' mediċini bijoloġiċi. Guidling Technology esperjenzat tim tekniku professjonali, li jkopri l-proċess ta 'filtrazzjoni minn prova żgħira, prova pilota, għal produzzjoni fuq skala kbira, il-filtri tal-membrana u tal-membrana tagħna jintużaw ħafna fil-prefiltrazzjoni, mikrofiltrazzjoni, ultrafiltrazzjoni, konċentrazzjoni ta' nanofiltrazzjoni, estrazzjoni u separazzjoni; Il-ħafna linji ta 'prodotti tagħna, minn filtrazzjoni żgħira tal-laboratorju ta' użu wieħed għal sistemi ta 'filtrazzjoni orjentati lejn il-produzzjoni, ittestjar ta' sterilità, fermentazzjoni, kultura taċ-ċelluli u aktar, jiżguraw produttività akbar.
Jiuling biex tiżgura l-kwalità tal-prodott bħala l-ewwel indikatur, fl-insegwiment ta '"tnaqqas l-ispejjeż, tiżdied l-effiċjenza" fit-triq biex tesplora, ħerqana li taħdem miegħek fil-futur biex tiffaċċja l-isfidi tal-industrija u tfittex żvilupp aħjar.