Applikazzjoni ta 'Ultrafiltrazzjoni fil-Proċess ta' Produzzjoni tat-Tilqim DTP

Applikazzjoni ta'Ultrafiltrazzjoni fil-PproduzzjoniProcess taDTP Vaccine

 

1. Vaċċin DTP

Il-pertussis, komunement magħrufa bħala sogħla konvulsiva, hija marda infettiva respiratorja akuta kkawżata minn Bordetella pertussis, li taffettwa primarjament trabi u tfal żgħar. Huwa trażmess permezz ta 'qtar respiratorju u għandu perjodu ta' inkubazzjoni ta '7 sa 10 ijiem. Il-pazjent se jiżviluppa sintomi ta 'akkumulazzjoni ta' sputum, inkluża sogħla. Id-difterite hija infezzjoni akuta tal-passaġġ respiratorju kkawżata minn Corynebacterium diphtheriae. Il-batterji jinvadu l-mukuża tal-imnieħer jew il-gerżuma, jipproliferaw, jipproduċu eżotossini u jikkawżaw infjammazzjoni lokali u nekrożi tat-tessuti. It-tetnu, ikkawżat minn Clostridium tetani, jidħol fil-ġisem tal-bniedem permezz ta 'feriti tal-ġilda jew tal-membrana mukuża. Tiffjorixxi f'kundizzjonijiet anerobiċi u tipproduċi tossini, li tikkawża kontrazzjonijiet tal-muskoli spasmodiċi.

Il-vaċċin DTP huwa vaċċin kombinat li fih komponenti effettivi ta 'Bordetella pertussis, tossina tad-difterite, u tossina tat-tetnu mħallta f'ċerti proporzjonijiet u adsorbiti fuq adjuvant ta' idrossidu tal-aluminju. Jintuża biex jipprevjeni tliet mardiet: pertussis, difterite u tetnu.

 

2. Proċess ta 'Produzzjoni ta' Vaċċin DTP

Il-vaċċin DTP huwa tipikament vaċċin inattivat. Il-preparazzjoni tal-vaċċin DTP issegwi l-proċess tal-produzzjoni tal-vaċċin inattivat, primarjament għal raġunijiet ta' sikurezza. Bħalissa, il-proċess ta 'produzzjoni ta' vaċċini DTP fiċ-Ċina huwa bbażat fil-biċċa l-kbira fuq it-teknoloġija fis-snin sebgħin u tmenin.Madankollu, matul il-proċess kollu, il-passi tad-dijalisi involvew wisq stadji ta 'filtrazzjoni konvenzjonali, li jaffettwaw b'mod sinifikanti l-proċess ta' produzzjoni ġenerali tal-prodott. Prodotti tanġenzjali ta 'filtrazzjoni tal-membrana tal-fluss b'kanali miftuħa joffru vantaġġi fis-separazzjoni downstream ta' prodotti bijoloġiċi, bħal forzi ta 'shear baxxi u rati għoljin ta' rkupru. Dawn huma partikolarment adattati għas-separazzjoni ta 'kampjuni b'konċentrazzjonijiet għolja, viskożitajiet għolja, u kontenut għoli ta' partiċelli, li jagħmluhom adattati għall-proċess ta 'produzzjoni ta' vaċċini DTP.

3. Applikazzjoni tat-Teknoloġija ta' Ultrafiltrazzjoni tal-Fibra vojta fil-Proċess ta' Purifikazzjoni ta' Likwidu Antiġenu ta' Vaċċin Magħqud DTP Ħieles Ċelluli

(1) Materjali u Metodi

①Kampjun

Soluzzjoni ta' antiġen DTP mingħajr ċelluli dekontaminata u raffinata (minn hawn 'il quddiem imsejħa soluzzjoni ta' antiġenu dekontaminata).

②Reaġenti u Strumenti ewlenin

Ilma għall-injezzjoni; klorur tas-sodju (grad farmaċewtiku); Borża tad-dijalisi; 10kDa fibra vojta; pompa peristaltika.

③Ultrafiltrazzjoni u Purifikazzjoni ta 'Likwidu Antiġenu DTP Ħieles Ċelluli

L-ewwelnett, ikkonċentra s-soluzzjoni ta' antiġenu dekontaminata għal madwar 5-darbiet il-volum inizjali billi tuża fibra vojta ta' 10kDa. Sussegwentement, ibda l-proċess ta 'filtrazzjoni u ħasil. Sussegwentement, waqqaf il-filtrazzjoni meta l-volum tal-filtrat jilħaq bejn wieħed u ieħor 4 sa 5 darbiet il-volum inizjali. Fl-aħħarnett, laħlaħ is-sistema kollha u rkupra l-filtrat billi tuża 1-volum ta' salina fiżjoloġika.

④Dijaliżi u Purifikazzjoni ta 'Likwidu Antiġenu DTP Ħieles Ċelluli

Ippakkja b'mod asettiku s-soluzzjoni ta' l-antiġenu dekontaminata f'boroż tad-dijalisi u daħħalha f'soluzzjoni ta' 0.85% sodium chloride sterili u mbagħad wettaq id-dijalisi fi grad 2-8 .

⑤Identifikazzjoni ta 'Likwidu Purifikat

Proporzzjonalment irrestawra l-ultrafiltrazzjoni u l-kampjuni likwidi rkuprati mid-dijalisi għall-volum ta 'pre-purifikazzjoni. Uża soluzzjoni ta' antiġenu dekontaminata bħala kontroll u analizza l-purità tal-kampjuni billi tuża 12% SDS-PAGE. Kejjel il-kontenut solidu fis-soluzzjonijiet u kkalkula r-rata ta' rkupru wara li tiċċentrifuga l-kampjuni f'10,000 rpm għal 15-il minuta.

Riżultati

①Konċentrazzjoni u Ħasil ​​ta 'Ultrafiltrazzjoni tal-Fibra Hollow

Matul il-proċess ta 'konċentrazzjoni ta' ultrafiltrazzjoni, 4,800 mL filtrat jinkiseb fi żmien 70 minuta, li jirriżulta f'konċentrazzjoni ta '{3}}darbiet. Ir-rata ta 'filtrazzjoni tonqos b'mod kostanti, b'rata ta' filtrazzjoni medja ta '42 LMH (69.6 mL/min). Matul il-proċess tal-ħasil, 5,300 mL filtrat jinkiseb fi żmien 90 minuta, li jirriżulta f'4.4-ħasil darbiet, u r-rata ta 'filtrazzjoni tonqos b'mod kostanti, b'rata medja ta' filtrazzjoni ta '36 LMH (59.5 mL/min). Fl-aħħarnett, laħlaħ is-sistema kollha b'1,200 mL salina fiżjoloġika, u ħallat is-soluzzjoni tat-tlaħliħ mas-soluzzjoni tal-ħasil preċedenti (1,200 mL). Il-fattur ta' konċentrazzjoni finali tal-likwidu huwa 2.5-darbiet. Meta mqabbla mal-ultrafiltrazzjoni, id-dijalisi teħtieġ li tinbidel id-dijalisi ħames darbiet u tieħu madwar 6 ijiem.

②Identifikazzjoni ta 'Likwidu Purifikat

L-analiżi SDS-PAGE wriet li l-purità tal-likwidu tal-antiġen tal-vaċċin DTP mingħajr ċelluli purifikat kemm mill-metodi ta 'ultrafiltrazzjoni kif ukoll tad-dijalisi tibqa' relattivament mhux mibdula, kif muri fil-figura hawn taħt. Ir-rata ta 'rkupru tal-purifikazzjoni tal-ultrafiltrazzjoni hija kemmxejn inqas minn dik tal-purifikazzjoni tad-dijalisi, kif indikat fit-tabella hawn taħt.

Kampjun	Kontenut solidu (%)	Rata ta' Irkupru (%)
Soluzzjoni Antiġenu Dekontaminata	0.872	/
Likwidu rkuprat bl-ultrafiltrazzjoni (imnaqqas)	0.803	92.1
Likwidu rkuprat mid-dijalisi (imnaqqas)	0.813	93.2

 

Konklużjoni

L-ultrafiltrazzjoni tal-fibra vojta hija teknoloġija ta 'separazzjoni tal-membrana użata ħafna f'industriji bħall-ikel, il-fermentazzjoni, il-farmaċewtiċi, il-protezzjoni ambjentali u l-inġinerija kimika għas-separazzjoni, il-konċentrazzjoni u l-purifikazzjoni ta' sustanzi molekulari kbar. F'dan l-esperiment, it-teknoloġija tal-ultrafiltrazzjoni tal-fibra vojta ġiet impjegata biex tippurifika s-soluzzjoni tal-antiġen DTP mingħajr ċelluli dekontaminati. L-esperimentatur meta mqabbel mad-dijalisi tradizzjonali f'termini ta 'effiċjenza ta' purifikazzjoni u rata ta 'rkupru. Ir-riżultati wrew li l-ultrafiltrazzjoni kellha effiċjenza ogħla fit-tneħħija ta' aġenti u pigmenti ta' ditossifikazzjoni (li jistgħu jinkisbu fi żmien 3 sigħat, meta mqabbla ma' 5-7 ijiem għad-dijalisi) u kellha rata ta' rkupru ogħla. Dawn jissuġġerixxu li l-applikazzjoni ta 'fibra vojta għall-purifikazzjoni tal-ultrafiltrazzjoni tal-likwidu tal-antiġen tal-vaċċin DTP mingħajr ċelluli hija fattibbli. Jista 'jissostitwixxi proċessi ta' dijaliżi eżistenti.