FAQs dwar Apparat tal-Filtru Ċentrifugali

Q1. Huwa meħtieġ li jiġu separati proteini ta 'piżijiet molekulari differenti, allura kemm għandha bżonn il-piżijiet molekulari tal-proteini?

A: Id-daqs taż-żewġ proteini jeħtieġ li jvarja b'10 darbiet jew aktar.

 

Q2. Jista 'ċentrifugaAlapparati tal-filtru jkunu sterilizzati u reżistenti għall-ħasil alkali?

A: Jista 'jiġi sterilizzat b'soluzzjoni akwea ta' etanol ta '75 fil-mija, u l-membrana tista' tiflaħ 0.1-0.5N sodium hydroxide alkali ħasil.

 

Q3. Kif tittratta jekk il-proteina preċipitat waqt il-konċentrazzjoni?

A: Jekk il-proteina hija kkonċentrata malajr wisq jew ikkonċentrata wisq, tista 'tikkawża preċipitazzjoni ta' proteina, u l-konċentrazzjoni finali tal-proteina wara l-konċentrazzjoni m'għandhiex tkun għolja wisq; Proteini li huma sensittivi għar-rata ta 'konċentrazzjoni u għandhom tendenza li jippreċipitaw, metodu ta' titjib issuġġerit:

Naqqas il-veloċità ċentrifugali

Uża membrana ta 'ultrafiltrazzjoni b'cut-off ta' piż molekulari ogħla

Blow u terda t-tubu ikkonċentrat u mbagħad ċentrifuga

 

Q4. X'inhi r-raġuni possibbli għaliex il-apparati tal-filtru ċentrifugalima jistgħux jiġu ċentrifugati isfel?

A: Tista 'tuża madwar 20 fil-mija soluzzjoni akwea ta' etanol għal ċentrifugazzjoni inizjali jekk it-tubu ta 'ultrafiltrazzjoni ma jistax jiġi ċentrifugat, minħabba li l-membrana ta' ultrafiltrazzjoni hija kompletament niexfa, il-wiċċ tal-membrana huwa dgħajjef idrofobiku, u l-fluss jista 'jiġi restawrat wara infiltrazzjoni b'livell baxx. solvent tat-tensjoni tal-wiċċ.

 

Q5. Metodi ta 'użu korrett u ħażna ta' apparati ta 'filtru ċentrifugali

A: L-apparati tal-filtru ċentrifugali għandhom jiġu ċentrifugati b'ilma purifikat qabel l-użu biex jivverifikaw l-integrità tiegħu. Wara kull użu, huwa meħtieġ li jinħażen fi stat imxarrab biex jipprevjeni li l-membrana tinxef.

 

Q6. Kif l-apparati tal-filtru ċentrifugali jneħħu l-endotossina?

A: L-apparati tal-filtru ċentrifugali li pprovdejna ma ġewx ittrattati b'endotossini, u minħabba li l-endotossini jeżistu ħafna fin-natura, kampjuni li jeħtieġu endotossini jistgħu jitnaddfu minn qabel b'0.5N idrossidu tas-sodju qabel l-esperiment, u mbagħad jinħaslu b' Ilma RO biex tneħħi l-biċċa l-kbira tal-endotossina.

 

Q7. Meta l-proteina kkonċentrata tintuża għall-analiżi downstream, jinstab li hemm interferenza, x'inhi r-raġuni?

A: L-apparati tal-filtru ċentrifugali jistgħu jinħaslu minn qabel b'soluzzjoni buffer jew ilma purifikat. Jekk l-interferenza għadha teżisti, aħsel b'0.1N sodium hydroxide, u mbagħad aħsel b'ilma purifikat.

 

Q8. It jinstab li m'hemm l-ebda proteina fil-mira fil-konċentrat wara l-konċentrazzjoni. X'inhuma r-raġunijiet possibbli?

A: 1) Il-konċentrazzjoni inizjali tal-proteina m'għandhiex tkun baxxa wisq, jekk il-konċentrazzjoni tkun baxxa wisq, il-membrana tista 'ma tkunx kapaċi żżomm.

2) Agħżel id-daqs xieraq tal-pori tal-membrana. Il-konċentrazzjoni ċentrifugali tat-tubu tal-filtru tappartjeni għal filtrazzjoni dead-end, u d-daqs tal-pori tal-membrana huwa ġeneralment inqas minn 2 darbiet jew aktar mill-proteina fil-mira.

3) Agħżel il-veloċità ċentrifugali t-tajba

4) Jekk il-proteina fil-mira tippreċipita

 

Q9. Trattament ta 'passivazzjoni ta' apparati ta 'filtru ċentrifugali

A: Pretrattament tal-passivazzjoni tal-wiċċ tal-apparati tal-filtru ċentrifugali jista 'jnaqqas it-telf ta' adsorbiment ta 'proteina fuq il-wiċċ tal-membrana, f'ħafna każijiet, trattament minn qabel tal-kolonna qabel ma tikkonċentra s-soluzzjoni tal-proteina dilwita tista' ttejjeb l-irkupru, Minħabba li s-soluzzjoni tista 'timla l-espost siti vojta ta 'assorbiment tal-proteini fuq il-membrana u l-wiċċ, il-metodu ta' passivazzjoni huwa li tixxarrab minn qabel il-kolonna b'volum għoli ta 'soluzzjoni ta' passivazzjoni għal aktar minn siegħa, laħlaħ il-kolonna sewwa b'ilma distillat, u mbagħad ċentrifuga l-kolonna darba b'ilma distillat biex tneħħi kompletament is-soluzzjoni ta 'passivazzjoni li tista' tibqa 'fuq il-membrana, oqgħod attent li ma tħallix il-membrana tinxef wara l-passivazzjoni, jekk trid iżżommha għal użu futur, għandek bżonn iżżid ilma distillat sterili biex iżżomm il-membrana mxarrba., jekk jogħġbok ikkuntattja inġiniera tagħna għal soluzzjonijiet ta 'passivazzjoni komuni.

 

Q10. Il-membrana tal-ultrafiltrazzjoni tiffiltra l-molekuli b'mod ġerarkiku?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 fil-mija jekk tuża membrana ta 'ultrafiltrazzjoni 100kd, madankollu, molekuli iżgħar mid-daqs tal-pori tal-membrana ma jgħaddux kompletament mill-membrana liberament. Ir-rata ta 'żamma molekulari ta' 67kd hija aktar minn 70 fil-mija, u l-proteina ta '43kd hija wkoll aktar minn 40 fil-mija maqtugħa, il-komponenti varji f'soluzzjoni mħallta jgħaddu mill-membrana mhux sempliċi u faċli daqs soluzzjoni ta' komponent wieħed, Fil-prattika , Jekk trid tiżola żewġ makromolekuli, id-differenza fil-piż molekulari bejniethom għandha tkun tmien darbiet jew aktar.

 

Q11. Kif tissepara b'mod effettiv molekuli kbar u żgħar permezz ta 'ultrafiltrazzjoni?

A: Minħabba l-ħtiġijiet tal-proċess, l-impuritajiet fil-makromolekuli jitneħħew, jew il-molekuli żgħar jitneħħew mill-makromolekuli, huwa normali fil-produzzjoni. Huwa ferm meħtieġ li tagħżel id-daqs xieraq tal-pori tal-membrana, il-metodu ta 'filtrazzjoni u l-kundizzjonijiet operattivi. B'mod ġenerali, jekk l-ispeċifikazzjoni MWCO tal-membrana tintgħażel bejn iż-żewġ proteini, tista 'tinkiseb separazzjoni relattivament ideali. Jekk is-soluzzjoni tal-proteina hija relattivament dilwita, l-operat taħt pressjoni baxxa jgħin ukoll biex jinkisbu riżultati aħjar. Agħżel filtrazzjoni tanġenzjali tal-fluss u wettaq dijafiltrazzjoni multipla biex tikseb effett ta 'separazzjoni aħjar.